Piroseqüenciació

De Viquipèdia
Dreceres ràpides: navegació, cerca

La piroseqüenciació o seqüenciació 454 és una tecnologia de determinació de seqüència de DNA a gran escla que es pot aplicar a genomes complets mitjançant lluminiscència. A diferència del sistema de Sanger, capaç de resoldre 67.000 bases cada hora, el mètode 454 pot determinar la seqüència de 20 milions en 4,5 hores, la qual cosa abarateix la despesa del procés.

Fonament[modifica | modifica el codi]

La mostra biològica es carrega en una placa PicoTiterPlate Device, de fibra òptica, que permet de transmetre la llum produïda per quimiolluminiscència durant la reacció de seqüenciació fins a la càmera CCD de captació d'imatges. Aquesta placa té moltes tassetes.

La particularitat és la mida del DNA a seqüenciar en cada tasseta: ha de ser entre 500 i 1000 nucleòtids. La genoteca de DNA genòmic amb què començar la seqüenciació es carrega a la placa, cada fragment s'hi amplifica de forma aïllada mitjançant emPCR o PCR basada en emulsió de mode que s'amplifiqui fins a 10 milions de vegades. Aquest increment facilita la detecció del senyal.

El fonament de la seqüenciació es basa a controlar el flux seqüencial i cíclic de nucleòtids sobre la placa en combinació amb un sistema de detecció biolluminiscent que permet de convertir els productes generats durant la incorporació de nucleòtids (pirofosfat) en llum (mitjançant la lucifrasa) que és detectable pel dispositiu CCD.